Genetski materijal Shigella, uzročnika dizenterije. Shigella - uzročnik bakterijske dizenterije
šigela Uzročnici dizenterije (shigellosis) su nekoliko vrsta bakterija objedinjenih u rod Shigella. Jednu od njih prvi je otkrio 1891. ruski liječnik A. Grigoriev, a proučavao ju je Shiga tijekom epidemije u Japanu 1898. godine. Kasnije su izolirane i opisane druge vrste Shigella. Prema suvremenoj klasifikaciji, rod Shigella uključuje 4 skupine, odnosno 4 vrste. Sve vrste, osim S. sonnei, podijeljene su na serovare, S. flexneri - također na podserovare (Tablica 8). Zadnjih desetljeća dizenteriju najčešće uzrokuju Shigella Flexner i Sonne, a rjeđe Shigella Boyd. S. dysenteriae (Grigorieva-Shiga) nije pronađena u Rusiji. Šigele su kratke gram-negativne štapiće; za razliku od salmonele, nemaju bičeve. Fakultativni anaerobi. Rastu na jednostavnim hranjivim podlogama, optimalna temperatura 37°C, pH 6,8-7,2. Razlikuju se po biokemijskim svojstvima (Tablica 5.) Glukoza fermentira, laktoza ne fermentira prvi dan (Shigella Sonne - nakon nekoliko dana), manitol fermentiraju sve vrste osim S. dysenteriae. Antigeni. Shigella sadrži O-antigene, neki serovari imaju K-antigen. Među O-antigenima postoje specifični i grupni. Stvaranje toksina. Egzotoksin s neurotropnim učinkom proizvodi S. dysenteriae, a ova vrsta uzrokuje bolest u najtežem obliku. Sve šigele sadrže toplinski stabilan endotoksin. Održivost. S. sonnei je najotpornija u vanjskom okruženju. Kuhanje odmah ubija šigele, na 60°C umiru nakon 10-20 minuta, ali postoje S. sonnei otporne na toplinu koje umiru samo na 70°C 10 minuta, odnosno mogu preživjeti pasterizaciju mlijeka. U vodi, tlu, hrani, na predmetima, u posuđu, Shigella ostaje održiva jedan do dva tjedna. S. sonnei se može razmnožavati u mlijeku. Shigella preživljava u crijevima muha i na njihovim nogama 2-3 dana. Prelijećući s kanalizacije i otpada na prehrambene proizvode, muhe mogu prenijeti patogene. Istodobno, Shigella je vrlo nestabilna u uzorcima fekalija, jer umiru pod utjecajem antagonističkih mikroba i kisele reakcije okoliša. Stoga se uzorci uzeti za istraživanje moraju odmah inokulirati na hranjivu podlogu. Bolest kod ljudi. Izvor zaraze je čovjek ili kliconoša. Mehanizam prijenosa je fekalno-oralni. Infekcija se javlja kroz usta. Razdoblje inkubacije traje od 2 do 7 dana. Uzročnik prodire u epitelne stanice sluznice debelog crijeva i umnožava se u njima. To dovodi do upale (kolitisa) i stvaranja čira. Glavni simptomi: povišena tjelesna temperatura, bolovi u donjem dijelu trbuha, povraćanje, učestalo pražnjenje crijeva, u teškim slučajevima mješavina sluzi i krvi u stolici; karakterističan simptom su tenezmi (lažni bolni nagoni). Bolest traje 8-10 dana. Pacijenti s blagim oblicima bolesti često ne traže kvalificiranu pomoć i samo-liječiti. Neliječena dizenterija može postati kronična. Imunitet. Nakon bolesti imunitet nije stabilan. Tijekom bolesti stvaraju se protutijela čije otkrivanje ima dijagnostičku vrijednost. Laboratorijska dijagnostika. Materijal za bakteriološko istraživanje je izmet (izmet). Uzorak treba uzeti prije početka antibakterijske terapije, odmah napraviti kulturu ili uzorak staviti u tekućinu za konzerviranje (30% glicerol i 70% pufer otopina) ne dulje od jednog dana. Za sjetvu odaberite grudice sluzi. Količina Shigella u uzorku može biti vrlo oskudna pa se inokulacija provodi na Ploskirevljevu elektivnu podlogu ili na podlogu za obogaćivanje - selenit. Izolirana čista kultura identificira se morfologijom, biokemijskim svojstvima i reakcijom aglutinacije sa serumima adsorbiranih vrsta. Odredite osjetljivost na antibiotike. Shigella je jedna od bakterija koja brzo stječe otpornost na antibiotike, u većini slučajeva povezana s R-plazmidima. Osim toga, antigeni Shigella otkrivaju se u izmetu pomoću ELISA testa. U dijagnostičke svrhe koriste se serološke reakcije: aglutinacija, RIGA. Antitijela se pojavljuju u drugom ili trećem tjednu bolesti. Ljekoviti lijekovi. Specifična prevencija nije razvijena. U područjima morbiditeta koristi se bakteriofag dizenterije. Liječenje antibioticima treba provoditi uzimajući u obzir osjetljivost patogena na njih. Koristite kloramfenikol, tetraciklin; Učinkoviti su nitrofuranski pripravci i polivalentni bakteriofag. Za kroničnu dizenteriju koristi se terapija cjepivom pomoću kemijskog cjepiva koje se daje oralno. Klebsiella Rod Klebsiella dobio je ime u čast njemačkog znanstvenika E. Klebsa. Predstavnici ovog roda su: Klebsiella pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Klebsiella rhinoscleromatis. Morfologija, kulturološka svojstva. Klebsiella su kratke, debele šipke. U preparatu se nalaze pojedinačno, u parovima iu kratkim lancima. Nemaju bičeve i ne tvore spore. Karakteristična značajka Klebsiella je stvaranje kapsula u tijelu i na hranjivim medijima. Rastu na jednostavnim hranjivim podlogama; na gustim podlogama stvaraju sluzave kolonije. Njihova se diferencijacija provodi prema biokemijskim karakteristikama. Antigeni. Klebsiella sadrži lipopolisaharidne O-antigene i polisaharidne kapsularne antigene, na temelju kojih se provodi serotipizacija. Neki antigeni su zajednički antigenima Escherichije i Salmonele. Patogenost u Klebsiella je povezana s prisutnošću kapsule koja sprječava fagocitozu i endotoksine. Održivost. Klebsiella je stabilna u vanjskom okruženju, dugo traje u vodi, na predmetima i mliječnim proizvodima te se može razmnožavati na sobnoj temperaturi iu hladnjaku. Umiru pri kuhanju i pri izlaganju dezinficijensima. Bolesti kod ljudi. Klebsiella pneumoniae uzrokuje upalu pluća (bronhopneumonija), ponekad i sepsu, cistitis, akutne crijevne infekcije; često se nalazi u miješanim infekcijama. Klebsiella ozena je uzročnik kronične bolesti gornjih dišnih putova s oslobađanjem viskoznog sekreta i stvaranjem krusta koje odaju neugodan miris. Bolest je zarazna i prenosi se kapljičnim putem. Klebsiella rhinoscleroma uzrokuje kronični upalni proces sluznice gornjih dišnih putova, uz stvaranje čvorića (granuloma). Imunitet. Protutijela se stvaraju tijekom bolesti, ali ne stvaraju imunitet. Kronični tijek bolesti povezan je s razvojem hipertireoze. Laboratorijska dijagnostika. Materijali koji se ispituju: za pneumoniju - sputum, za ozenu - sluz iz ždrijela, nosa, dušnika, za rinosklerom - komadići tkiva iz granuloma. Istraživanje se temelji na izolaciji čistih kultura i identifikaciji prema morfologiji, kulturi, biokemijskim svojstvima i određivanju serovara. Provodi se RSK radi otkrivanja antitijela u krvnom serumu bolesnika. Ljekoviti lijekovi. Prevencija cjepivom nije razvijena. Za liječenje se koriste antibiotici (streptomicin, kloramfenikol, neomicin, tetraciklin) i pripravci antimona. Protea Među bakterijama roda Proteus, Proteus vulgaris i Proteus mirabilis mogu biti uzročnici prehrambenih toksičnih infekcija i gnojno-upalnih procesa. Morfologija, kultura, biokemijska svojstva. Proteji su polimorfni štapići, kratki, dugi, nitasti, ne tvore spore niti kapsule, imaju bičeve smještene peritrihijalno. Gram negativan. Dobro rastu na jednostavnim hranjivim medijima. Za proteje je karakterističan "puzajući" rast u obliku plavkaste prevlake na gustim hranjivim medijima, koji nastaje rojenjem H-formi. Sojevi koji su izgubili flagele i sposobnost rojenja stvaraju kolonije glatkih rubova (O-forma). Prilikom sjetve prema metodi Shukevicha u kondenzacijsku vodu na dnu epruvete s kosim agarom, Proteus brzo pokriva cijelu njegovu površinu. Proteji imaju dobro definirana proteolitička svojstva: ukapljuju želatinu i zgrušanu sirutku, zgrušavaju mlijeko, razgrađuju ureu i stvaraju sumporovodik, indol i amonijak. Mnogi ugljikohidrati su fermentirani. Antigeni. Proteje imaju O-antigene i H-antigene, od kojih su neki zajednički drugim enterobakterijama. Stvaranje toksina. Oni ne proizvode egzotoksin, oni sadrže lipopolisaharid endotoksin stanične stijenke. Postojanost i širenje. Bakterije roda Proteus široko su rasprostranjene u vanjskom okruženju. Nalaze se u tlu, vodi te u crijevima ljudi i životinja. Sudjeluju u procesima truljenja, množeći se u otpadu koji sadrži organske tvari. Bolesti kod ljudi. Proteji su oportunistički mikrobi. Mogu izazvati gnojno-upalne bolesti kod ljudi: gnojenje rana, otitis media, peritonitis, pijelonefritis, cistitis. Kada se jede hrana koja sadrži velike količine ovih bakterija, dolazi do bolesti koje se prenose hranom. P. mirabilis uzrokuje gnojno-upalne bolesti mokraćnog sustava. Mogu nastati kao posljedica unošenja bakterija urološkim instrumentima. U novorođenčadi ulazak Proteusa u pupčanu ranu dovodi do septičkog procesa. Laboratorijska dijagnostika. Ovisno o bolesti, materijali koji se testiraju su gnoj, urin, povraćani sadržaj i prehrambeni proizvodi. Koristi se Shukevichev način sjetve. Izolirane čiste kulture identificiraju se kulturalnim i biokemijskim svojstvima te reakcijom aglutinacije. Ljekoviti lijekovi. Koriste se bakteriofag coli-proteus, na-lidiksična kiselina i antibiotici. Jersinija Među bakterijama iz roda Yersinia bolesti kod ljudi uzrokuju Yersinia peslis (uzročnik kuge), Yersinia pseudotuberculosis i Yersinia enterocolitica. Yersinia kuga Yersinia pestis otkrili su 1894. godine A. Yersin i S. Kitazato tijekom epidemije kuge u Hong Kongu. Morfologija, kultura, biokemijska svojstva. Y. pestis su gram-negativne male jajolike štapiće veličine 1-2 µm, nepokretne. Ne stvaraju spore, imaju kapsulu. U razmazima iz patološkog materijala boje se metilenskim modrilom najintenzivnije na krajevima - bipolarno (slika 31). Kada se razmnožavaju na čvrstim hranjivim podlogama, izgledaju poput duguljastih štapića. Fakultativni anaerobi. Rastu na jednostavnim hranjivim podlogama pri temperaturi od 28°C, ali mogu rasti i na nižim temperaturama (do +5°C), čime se može izolirati čista kultura. U tekućim hranjivim podlogama štapići kuge stvaraju film na površini i niti koje se spuštaju od njega, slično stalaktitima, i sediment u obliku pahuljica. Na gustom hranjivom mediju stvaraju kolonije koje nalikuju "čipkastom rupčiću" - s gustim središtem i nazubljenim rubovima. Takvi R-oblici kolonija stvaraju virulentne sojeve, a S-oblici nevirulentne sojeve. Za identifikaciju se koriste karakteristična kulturološka svojstva Yersinia kuge. Ugljikohidrati se fermentiraju u kiselinu. Proteolitička aktivnost je slabo izražena (tablica 9). Antigeni.Štapići kuge sadrže somatski termostabilni antigen, zajednički drugim Yersinijama, kao i antigen zajednički eritrocitima ljudi O-skupine. Virulentni sojevi imaju kapsularni termolabilni antigen, koji je povezan s imunogenošću patogena. Faktori patogenosti. Bacili kuge stvaraju otrovne tvari koje se nalaze u tijelu bakterije iu kapsuli i imaju svojstva egzo- i endotoksina. Virulencija je također posljedica površinskih tvari s antifagocitnim djelovanjem i enzima: hijaluronidaza, fibrinolizin, hemolizini, plazmakoagulaza. Održivost. Oni mogu dugo preživjeti u vanjskom okruženju, dobro podnose niske temperature, u smrznutim leševima, buhe - godinu dana ili više, u mlijeku - 3 mjeseca. Kada se kuhaju, umiru unutar 1 minute. Osjetljivo na dezinficijense. Izravna sunčeva svjetlost ubija ih u roku od 2-3 sata. Bolesti kod ljudi. Glavni rezervoar Yersinia kuge u prirodi su glodavci (gofovi, tarbagani, štakori itd.). Kuga je zoonotska bolest. Izvor infekcije za ljude su životinje i ljudi. Do zaraze od životinja dolazi prijenosnim putem - ugrizom zaražene buhe, kontaktom. U tom slučaju mikrob prodire u kožu. Od osobe koja boluje od plućne kuge uzročnik se prenosi zrakom. Klinički oblik kuge ovisi o mjestu ulaska infekcije. Bubonski oblik nastaje prodiranjem uzročnika kroz kožu, nakon čega dolazi do oštećenja regionalnih limfnih čvorova koji se, povećavajući se, pretvaraju u bubone. Odavde se uzročnici mogu širiti limfnim ili krvnim žilama, uzrokovati oštećenje drugih limfnih čvorova i dovesti do razvoja septičkog oblika i sekundarne plućne upale pluća. Kada se zarazi zrakom, razvija se primarna plućna kuga. Kod svih oblika kuge patološki proces zahvaća sve organe i sustave. Imunitet. Nakon preležane bolesti imunitet je stabilan. Laboratorijska dijagnostika. Kuga je posebno opasna infekcija. Sve studije se provode u posebnim laboratorijima visoke sigurnosti, obučeno osoblje je sadržaj bubona, sputuma, izmeta, dijelova tijela mrtvih, bakterioskopije materijal otkriva gram-negativne bipolarne štapiće, preliminarna dijagnoza se postavlja na temelju izolacije čiste kulture i njezine identifikacije, kulture, biokemijskih, antigenskih svojstava, osjetljivosti na bakteriofag kuge razlikuju ih od drugih vrsta Yersinia.Također se koristi RIF.U materijalima iz pokvarenih životinjskih leševa moguće je otkriti antigen kuge pomoću reakcije precipitacije živo cjepivo protiv kuge koje sadrži streptomicin i tetracikline su učinkoviti među terapijskim sredstvima. Yersinia pseudotuberculosis Yersmm pseudotuberculosis - uzročnik pseudotuberculosis - otkrili su L Malasse i R Vignal 1883. Uzrokuje bolesti karakterizirane stvaranjem čvorova koji su izvana slični tuberkulozi grimizna groznica" Morfologija, kultura, biokemijska svojstva. Gram-negativne kokobakterije, ne stvaraju spore, imaju bičeve i kapsulu, dobro se razmnožavaju na jednostavnim hranjivim podlogama za epidemiologiju bolesti. Optimalna temperatura za razmnožavanje je 20-28 °C; također se razmnožavaju na 0 - +4°C Fermentiraju ramnozu i ureu (Tablica 9) Antigeni. Sadrže O-somatske i H-flagelarne antigene Serovari i subserovari se razlikuju po O- i H-antigenima Patogeni čimbenici. Yersinia pseudotuberculosis sadrži endotoksin koji se oslobađa kada uginu. Neki serovari proizvode egzotoksine Održivost. Stabilni u vanjskom okruženju. Budući da su psihrofili, mogu se akumulirati u velikim količinama u prehrambenim proizvodima koji se dugo čuvaju u hladnjaku. Kada se kuhaju, umiru u roku od nekoliko sekundi, osjetljivi su na dezinficijense Bolesti kod ljudi. Izvor zaraze su glodavci. Zaraza ljudi se najčešće događa putem prehrane. Oznake: "+" - prisutnost karakteristike, "-" - odsutnost karakteristike, "±" - znak nepostojanih proizvoda koji nisu bili podvrgnuti toplinskoj obradi. Važan je i vodeni put prijenosa. Patogeni ulaze u ljudsko tijelo kroz usta. Prevladavši zaštitnu barijeru želuca, ulaze u tanko crijevo, što rezultira gastroenteritisom. Prodiranje uzročnika u mezenterične čvorove dovodi do razvoja limfadenitisa sa znakovima iritacije peritoneuma i stvaranjem infiltrata (pseudotuberkulozni apendicitis). Kada Yersinia probije u krv, javljaju se generalizirani oblici s oštećenjem zglobova, s manifestacijama šarlaha. Imunitet. Protutijela se otkrivaju tijekom bolesti, ali nemaju zaštitni učinak. Laboratorijska dijagnostika Zbog široke raznolikosti manifestacija bolesti, ključno je. Materijal za bakteriološko istraživanje je krv, izmet i povraćani sadržaj. Uzgoj uzročnika i izolacija čiste kulture provodi se na njihovoj optimalnoj temperaturi. Čista kultura se razlikuje od drugih Yersinija po biokemijskim svojstvima. Za serološku dijagnostiku ispituju se upareni serumi uzeti na početku i u trećem tjednu bolesti u reakciji aglutinacije i RNGA. Ljekoviti lijekovi. Specifična prevencija nije razvijena. Za liječenje se koriste kloramfenikol i drugi antibiotici, nitrofuranski lijekovi. Uzročnik crijevne jersinioze Yersinia enterocolitica opisali su 1939. J. Schleifstein i M. Coleman. Širenje yersiniosis u mnogim zemljama svijeta uočeno je od kasnih 60-ih. Morfologija, kultura, biokemijska svojstva.Y. ente-rocolitica su gram-negativne polimorfne štapiće, ne tvore spore niti kapsule, a imaju peritrične flagele. Psihrofili, uzgojeni na 20-26°C, mogu se razmnožavati i na nižim temperaturama. Na 37°C gube pokretljivost. Raste na jednostavnim hranjivim medijima. Što se tiče enzimskih svojstava, aktivnije su od ostalih jersinija (tablica 9). Postoji 5 biokemijskih varijanti Y. enterocolitica. Antigeni. Imaju O- i H-antigene. Na temelju O-antigena dijele se na serovare. Stvaranje toksina. Sadrže endotoksin koji se oslobađa kada se bakterijske stanice unište. Neki sojevi proizvode egzotoksin. Tijelo pokazuje sposobnost adhezije, intracelularne reprodukcije i invazije (potonje je manje izraženo nego kod Yersinia pseudotuberculosis). Održivost. Otporan na niske temperature. Na temperaturi kućnog hladnjaka (4-8°C) mogu dugo preživjeti i razmnožavati se na povrću, voću i mlijeku. Kada se kuhaju umiru u roku od nekoliko sekundi. Osjetljivo na dezinficijense. Bolesti kod ljudi.Y. enterocolitica su široko rasprostranjene u prirodi. Izvor zaraze su glodavci i domaće životinje. Istodobno, patogeni se mogu razmnožavati u vanjskom okruženju kao saprofiti. Prema tome, jersiniozu možemo klasificirati kao saprozoonozu. Glavni put infekcije je nutritivni. Čimbenici prijenosa uključuju kontaminirane mesne proizvode, povrće, mlijeko i vodu. Prodirući kroz usta i prevladavajući zaštitnu barijeru želuca, ulaze u crijevo, uzrokujući upalu ileuma, mezenteričnih limfnih čvorova, a ponekad i slijepog crijeva i cekuma. Razvija se opijenost i alergijsko stanje. Dolaskom uzročnika u krv dolazi do bakterijemije i generaliziranih oblika bolesti. Imunitet. Tijekom bolesti otkrivaju se antitijela na patogen, ali imunitet nije jak. Laboratorijska dijagnostika. Materijali za bakteriološku pretragu su nazofaringealni lavaž, krv, urin, cerebrospinalna tekućina i odstranjeni vermiformni apendiks. U optimalnim temperaturnim uvjetima za patogena izdvaja se čista kultura, identificira se morfološkim i enzimskim svojstvima te se određuje serovar. Serološka dijagnoza provodi se uparenim serumima pomoću reakcije aglutinacije, RNGA, ELISA. Ljekoviti lijekovi. Specifična prevencija nije razvijena. Za liječenje se koriste kloramfenikol i drugi antibiotici, biseptol i nitrofuranski lijekovi. KOLERA VIBRIO Vibrio kolere Vibrio cholerae je prvi put izoliran iz fecesa pacijenata i leševa onih koji su umrli od kolere, a proučavao ga je R. Koch 1882. u Egiptu. Godine 1906. F. Gottschlich je u karantenskoj postaji El Tor u Egiptu iz fecesa hodočasnika izolirao vibrio sličan Kochovom vibriju. SZO je 1962. priznala etiološku ulogu Vibrio eltor. Dakle, prepoznato je postojanje dva biovara: V. cholerae i V. eltor. Morfologija, kultura, biokemijska svojstva. Vibrios cholerae imaju oblik tankog zakrivljenog štapića, koji podsjeća na zarez, dug 2-4 mikrona, gram negativan, ne stvara spore i kapsule, ima jedan bič (monotrichus), vrlo je pokretljiv (slika 32). Vrlo nepretenciozan prema hranjivim medijima. Dobro rastu na jednostavnim alkalnim hranjivim podlogama (pH 8,5-9,0), optimalna temperatura za njihov rast je 37°C. Izborni medij za njih je alkalna peptonska voda i alkalni agar. Karakteristična značajka Vibrio cholerae je brzi rast. Budući da se radi o aerobiku, stvaraju film na površini medija u alkalnoj peptonskoj vodi nakon 3-4 sata. Na gustim podlogama rastu u obliku prozirnih plavkastih kolonija. Vibrio cholerae pokazuje enzimatsku aktivnost: ukapljuje želatinu, stvara indol, brzo razgrađuje škrob, razgrađuje majnozu i saharozu do kiseline, ne razgrađuje arabinozu (Heibergova skupina I), što je test za njihovo razlikovanje od ostalih vibrija. Antigeni. Vibrioni imaju O-antigene i H-antigene. Diferencijacija vrsta provodi se pomoću O-antigena (poznato ih je 139). Vibrioni kolere - Vibrio cholerae i Vibrio eltor pripadaju 01. Međusobno se ne razlikuju po antigenskoj strukturi. Antigen O1 sastoji se od komponenti A, B i C. Na temelju ovih komponenti, vibriji kolere se dijele na serovare: serovar Ogawa sadrži komponente A i B, Inaba - A i C, Gikoshima - A, B i C. Godine 1992. U Madrasu ( Indija), a zatim iu drugim azijskim zemljama, uočene su masovne bolesti kolere, uzrokovane Vibrio cholerae, koji ima antigen ne O1, već O139. Ovo je nova vrsta Vibrio cholerae O139Bengal (Bengal). Postoje vibrioni slični koleri, ali nisu aglutinirani O-serumom. Nazvani su neaglutinirajući vibrioni (NAV) koji se oslobađaju kod proljeva i zdravih ljudi i uzrokuju gastroenteritis, koji može biti popraćen intoksikacijom. Čimbenici patogeneze. Vibrio cholerae proizvodi egzotoksin koji se zove "kolerogen". Pod utjecajem kolerogena u tankom crijevu dolazi do gubitka vode te iona natrija, kalija i klora. Također imaju sposobnost prianjanja. Nisu invazivni – ne prodiru u stanice i krv. Održivost. Vibriosi su osjetljivi na visoke temperature: na 60 ° C umiru nakon 5 minuta, kada se kuhaju - odmah. Brzo ugibaju kada se osuše i izlože svjetlosti. Dobro podnose niske temperature i čuvaju se u ledu nekoliko dana. U prehrambenim proizvodima, vodi, tlu i izmetu preživljavaju od nekoliko dana do nekoliko tjedana. Vibrioni su vrlo osjetljivi na kiseline, čak i niske koncentracije. U otopini klorovodične i sumporne kiseline u omjeru 1:10 000 uginu unutar nekoliko sekundi. Dezinficijensi u normalnim koncentracijama ubijaju ih za nekoliko minuta. Vibrio eltor je u usporedbi s Vibrio cholerae otporniji na različite vanjske čimbenike. Bolesti kod ljudi. Kolera je antroponozna infekcija. Izvor zaraze su bolesni ljudi i kliconoše. Mehanizam prijenosa je fekalno-oralni, najčešće se kolera prenosi vodom, rjeđe hranom i kontaktom u kućanstvu. Razdoblje inkubacije kolere je od nekoliko sati do 5 dana. Nakon što kroz usta dospiju u želudac, vibriji kolere mogu umrijeti pod utjecajem kiselog želučanog soka. Uz nisku kiselost, rizik od razvoja bolesti je veći. Prevladavši želučanu barijeru, vibriosi prodiru u tanko crijevo, pričvršćuju se za epitel i množe se. Oslobođeni kolerogeni uzrokuju poremećaj metabolizma vode i soli - gubitak vode i soli. Klinički se to očituje obilnim proljevom, Imunitet. U tijeku bolesti stvaraju se antitoksini i antimikrobna protutijela. Sekretorni IgA ima zaštitnu ulogu, sprječavajući prianjanje Vibrio cholerae na epitelne stanice tankog crijeva. Laboratorijska dijagnostika. Materijal za istraživanje je izmet i bljuvotina, a tijekom obdukcije leševa - segment tankog crijeva. Voda, prehrambeni proizvodi, kao i crijevni sadržaj zdravih ljudi također se ispituju na nosivost. Istraživanja se provode u laboratoriju posebno opasnih infekcija. Prilikom preuzimanja i slanja potrebno je pridržavati se sigurnosnih mjera. Mikrobiološka pretraga važna je za liječenje i treba je obaviti što prije. Mikroskopski pregled razmaza ispitivanog materijala je preliminaran. Prvi približni odgovor može se dobiti prilikom postavljanja RIF-a. Nakon 5-6 sati, u usjevima na tekućim hranjivim podlogama, pregledava se film na površini podloge, utvrđuje se morfologija i pokretljivost te se izvodi reakcija aglutinacije sa specifičnim serumom. Prvi preliminarni odgovor je dan. Nakon 10-12 sati, kolonija se proučava na čvrstim hranjivim medijima i daje se drugi preliminarni odgovor. Konačni odgovor daje se nakon izolacije i proučavanja čiste kulture. Identifikacija kulture provodi se na temelju morfologije, pokretljivosti, aglutinacije sa specifičnim serumima i proučavanja biokemijskih svojstava. Za razlikovanje Vibrio eltor od Vibrio cholerae koristi se njegova sposobnost da raste u hranjivom mediju s polimiksinom, aglutinira kokošje eritrocite i da se lizira specifičnim bakteriofagom. Preventivni i terapeutski lijekovi. Za liječenje je najvažnije nadoknaditi nedostatak vode i elektrolita uz pomoć slanih otopina. Korištenje tetraciklina nadopunjuje liječenje i omogućuje vam smanjenje volumena primijenjenih slanih otopina. Za specifičnu prevenciju postoje cjepiva: 1) dead corpucular; 2)kolerogen-anatoksin; 3) pridruženo cjepivo (kolerogeni toksoid + O-antigen).
Prvi. U sjeni povijesti (1877.-1917.) Drugo poglavlje
DokumentSvezak prvi PROLOG - ŽIVOT Prvo poglavlje. U POVIJESNOJ SJENI (1877.-1917.) Drugo poglavlje. DVIJE ISTINE (1917-1923) Treće poglavlje. SHEMA I SHEMA (1924.-1925.)Četvrta glava.
Metodološke preporuke za izvođenje samostalnog rada i izučavanje disciplina “Mikrobiologija” i “Osnove mikrobiologije” za redovite studente specijalnosti 260204 “Tehnologija fermentacijske proizvodnje i vinarstva”
SmjerniceSamostalni rad studenata Metodičke preporuke za izvođenje samostalnog rada i izučavanje discipline “Opća biologija i mikrobiologija” za redovite studente specijalnosti 240901 “Biotehnologija”;
Samostalan radRazvijen u skladu s Državnim obrazovnim standardima visokog stručnog obrazovanja za područja izobrazbe za specijalnost 240901 "Biotehnologija" na temelju obrazovnog standarda akademske discipline "Opća biologija i mikrobiologija".
Značajke biološke aktivnosti egzopolisaharida iz bakterija roda Lactobacillus i perspektive njihove primjene 03. 02. 03 mikrobiologija
SažetakObrana disertacije održat će se u lipnju 2012. u 00 sati na sastanku disertacijskog vijeća D 220.061.04 na Saratovskom državnom agrarnom sveučilištu nazvanom po N.
Udžbenik sadrži pravila za pružanje prve pomoći u različitim situacijama, osnove mikrobiologije, imunologije, prevencije i liječenja zaraznih bolesti,
TutorialAizman R.I. Osnove medicinskih znanja i zdravog načina života [Tekst]: [za nastavnike. specijalista. viši i srijeda udžbenik ustanove] / R. I. Aizman, V. B. Rubanovich, M.
Rod Shigella uključuje više od 40 serotipova. To su kratke, nepokretne gram-negativne štapiće koje ne tvore spore ili kapsule, koje dobro rastu na običnim hranjivim podlogama i ne rastu na izgladnjelim podlogama s citratom ili malonatom kao jedinim izvorom ugljika; ne stvaraju H2S, nemaju ureazu; Voges-Proskauerova reakcija je negativna; glukoza i neki drugi ugljikohidrati fermentiraju uz stvaranje kiseline bez plina (osim nekih biotipova Shigella flexneri: S. manchester i S. newcastle); U pravilu ne fermentiraju laktozu (osim Shigella Sonne), adonitol, salicin i inozitol, ne ukapljuju želatinu, obično tvore katalazu i nemaju lizin dekarboksilazu i fenilalanin deaminazu. Sadržaj G + C u DNA je 49-53 mol%. Šigele su fakultativni anaerobi, optimalna temperatura za rast je 37°C, ne rastu na temperaturama iznad 45°C, optimalni pH okoliša je 6,7-7,2. Kolonije na gustom mediju su okrugle, konveksne, prozirne; u slučaju disocijacije nastaju kolonije hrapavog R-forma. Rast na MPB u obliku jednolike mutnoće, hrapavi oblici formiraju sediment. Svježe izolirane kulture Shigella Sonne obično formiraju kolonije dva tipa: male okrugle konveksne (faza I), velike ravne (faza II). Priroda kolonije ovisi o prisutnosti (faza I) ili odsutnosti (faza II) plazmida molekulske mase 120 MD, koji također određuje virulentnost Shigella Sonne.
Međunarodna klasifikacija šigela temelji se na njihovim biokemijskim karakteristikama (manitolne fermentirajuće, manitolno fermentirajuće šigele, sporo laktozno fermentirajuće šigele) i karakteristikama antigenske strukture.
Šigele imaju O-antigene različite specifičnosti: zajedničke za obitelj Enterobacteriaceae, generičke, specifične za vrstu, grupu i tip, kao i K-antigene; Nemaju N-antigene.
Klasifikacija uzima u obzir samo O-antigene specifične za skupinu i tip. U skladu s ovim karakteristikama, rod Shigella podijeljen je u 4 podskupine, odnosno 4 vrste, te uključuje 44 serotipa. Podskupina A (vrste Shigella dysenteriae) uključuje vrste Shigella koje ne fermentiraju manitol. Vrsta uključuje 12 serotipova (1-12). Svaki serotip ima svoj specifični tip antigena; antigene veze između serotipova, kao i s drugim vrstama Shigella, slabo su izražene. Podskupina B (vrsta Shigella flexneri) uključuje Shigelle, koje obično fermentiraju manitol. Šigele ove vrste međusobno su serološki srodne: sadrže tip-specifične antigene (I-VI), prema čemu se dijele na serotipove (1-6/" i grupne antigene, koji se u svakom serotipu nalaze u različitim sastavima. i prema kojima se serotipovi dijele na podserotipove Osim toga, ova vrsta uključuje dvije antigene varijante - X i Y, koje nemaju tipične antigene, a serotip S.flexneri 6 nema podserotipove , ali se dijeli na 3 biokemijska tipa prema karakteristikama fermentacije glukoze, manitola i dulcitola.
Lipopolisaharidni antigen O kod svih Shigella Flexner sadrži antigen skupine 3, 4 kao glavnu primarnu strukturu, njegovu sintezu kontrolira kromosomski gen lokaliziran blizu his-lokusa. Tipski specifični antigeni I, II, IV, V i antigeni skupine 6, 7, 8 rezultat su modifikacije antigena 3, 4 (glikozilacija ili acetilacija) i određeni su genima odgovarajućih konvertirajućih profaga, mjestom integracije od kojih se nalazi u lac-pro regiji kromosoma Shigella.
Pojavio se u zemlji 80-ih godina. XX. stoljeća i rašireni novi subserotip S.flexneri 4 (IV:7, 8) razlikuje se od subserotipa 4a (IV;3,4) i 4b (IV:3, 4, 6), proizašao iz varijante S.flexneri Y (IV: 3, 4) zbog lizogenizacije njegovim konvertirajućim profagima IV i 7, 8.
Podskupina C (Shigella boydix vrsta) uključuje Shigelle, koje obično fermentiraju manitol. Članovi skupine se serološki razlikuju jedni od drugih. Antigene veze unutar vrste su slabo izražene. Vrsta uključuje 18 serotipova (1-18), od kojih svaki ima svoj glavni tip antigena.
Podskupina D (Shigella sonet vrste) uključuje Shigelle, koje obično fermentiraju manitol i sposobne su polagano (nakon 24 sata inkubacije i kasnije) fermentirati laktozu i saharozu. Vrsta 5. sonnei uključuje jedan serotip, ali kolonije faza I i II imaju svoje antigene specifične za tip. Za intraspecifičnu klasifikaciju Shigella Sonne predložene su dvije metode:
dijeleći ih u 14 biokemijskih tipova i podtipova prema njihovoj sposobnosti fermentacije maltoze, ramnoze i ksiloze;
podjela na tipove faga prema osjetljivosti na skup odgovarajućih faga.
Ove metode tipizacije imaju uglavnom epidemiološki značaj. Osim toga, Shigella Sonne i Shigella Flexner za istu svrhu podvrgavaju se tipizaciji na sposobnost sintetiziranja specifičnih kolicina (kolicino-genotipizacija) i na osjetljivost na poznate kolicine (kolicinotipizacija). Za određivanje vrste kolicina koje proizvodi Shigella, J. Abbott i R. Chenon predložili su skupove standardnih i indikatorskih sojeva Shigella, te za određivanje osjetljivosti Shigella na poznate vrste kolicina, Skup referentnih kolicinogenih sojeva P. Fredericka koristi se.
Dizenterija je zarazna bolest koju karakterizira opća intoksikacija tijela, proljev i osebujna lezija sluznice debelog crijeva. Jedna je od najčešćih akutnih crijevnih bolesti u svijetu. Dizenterija je poznata od davnina pod nazivom "krvavi proljev", ali pokazalo se da je njezina priroda drugačija. Godine 1875. ruski znanstvenik F. A. Lesh je iz bolesnika s krvavim proljevom izolirao amebu Entamoeba histolytica u sljedećih 15 godina utvrđena je samostalnost ove bolesti za koju se zadržao naziv amebijaza.
Uzročnici same dizenterije su velika skupina biološki sličnih bakterija, objedinjenih u rod Shigella. Po prvi put patogen 1888. otkrili A. Chantemes i F. Vidal; 1891. opisao ga je A.V.Grigoriev, a 1898. K. Shiga uz pomoć primljeno Identificirani serum pacijenta patogen u 34 bolesnika s dizenterijom, čime je konačno dokazana etiološka uloga ove bakterije . Međutim, u narednim su godinama otkriveni i drugi patogeni dizenterija : 1900. - S. Flexner, 1915. - K. Sonne, 1917. - K. Stutzer i K. Schmitz, 1932. - J. Boyd, 1934. - D. Large, 1943. - A. Sax.
Otpornost na Shigella
Shigella ima prilično visoku otpornost na čimbenike okoliša. Preživljavaju na pamučnoj tkanini i papiru do 0-36 dana, u osušenom izmetu - do 4-5 mjeseci, u tlu - do 3-4 mjeseca, u vodi - od 0,5 do 3 mjeseca, na voću i povrću - do 2 tjedna, u mlijeku i mliječnim proizvodima - do nekoliko tjedana; na temperaturi od 60 C ugibaju za 15-20 minuta. Osjetljivo na otopine kloramina, aktivni klor i druga sredstva za dezinfekciju.
Faktori patogenosti
Najvažnije biološko svojstvo šigela, koje određuje njihovu patogenost, jest sposobnost invazije epitelnih stanica, razmnožavanja u njima i uzrokovanja njihove smrti. Ovaj se učinak može otkriti pomoću keratokonjunktivalnog testa (uvođenje jedne petlje kulture Shigella (2-3 milijarde bakterija) ispod donjeg kapka zamorca uzrokuje razvoj serozno-gnojnog keratokonjunktivitisa), kao i infekcijom stanica kulturama (citotoksični učinak) ili pilećim embrijima (njihova smrt), ili intranazalno u bijelih miševa (razvoj pneumonije). Glavni faktori patogenosti Shigella mogu se podijeliti u tri skupine:
čimbenici koji određuju interakciju s epitelom sluznice;
čimbenici koji osiguravaju otpornost na humoralne i stanične obrambene mehanizme makroorganizma i sposobnost šigele da se razmnožava u svojim stanicama;
sposobnost stvaranja toksina i toksičnih proizvoda koji određuju razvoj samog patološkog procesa.
U prvu skupinu spadaju čimbenici adhezije i kolonizacije: njihovu ulogu igraju pili, proteini vanjske membrane i LPS. Adheziju i kolonizaciju pospješuju enzimi koji uništavaju sluz - neuraminidaza, hijaluronidaza, mucinaza. Druga skupina uključuje čimbenike invazije koji potiču prodiranje Shigella u enterocite i njihovu reprodukciju u njima iu makrofagima uz istodobnu manifestaciju citotoksičnog i (ili) enterotoksičnog učinka. Ova svojstva kontroliraju geni plazmida molekularne težine 140 MD (kodira sintezu proteina vanjske membrane koji uzrokuju invaziju) i kromosomski geni Shigella: ksr A (uzrokuje keratokonjunktivitis), cyt (odgovoran za uništavanje stanica ), kao i drugi geni koji još nisu identificirani. Zaštitu Shigella od fagocitoze osigurava površinski K-antigen, antigeni 3,4 i lipopolisaharid. Osim toga, lipid A endotoksina Shigella ima imunosupresivni učinak: potiskuje aktivnost stanica imunološke memorije.
Treću skupinu čimbenika patogenosti čine endotoksin i dvije vrste egzotoksina koje nalazimo u Shigella - Shiga i egzotoksini slični Shigi (SLT-I i SLT-II), čija su citotoksična svojstva najjače izražena u S. dysenteriael. Shiga- i shiga-slični toksini također se nalaze u drugim serotipovima S. dysenteriae; također ih proizvode S.flexneri, S. boydii, EHEC i neke Salmonella. Sintezu ovih toksina kontroliraju tox geni konvertirajućih faga. Enterotoksini tipa LT nalaze se u Shigella Flexner, Sonne i Boyd. Njihovu LT sintezu kontroliraju plazmidni geni. Enterotoksin stimulira aktivnost adenilat ciklaze i odgovoran je za razvoj proljeva. Shiga toksin, ili ne-irotoksin, ne reagira sa sustavom adenilat ciklaze, ali ima izravan citotoksični učinak. Shiga i shigi slični toksini (SLT-I i SLT-II) imaju m.m. 70 kDa i sastoje se od podjedinica A i B (zadnja od 5 identičnih malih podjedinica). Receptor za toksine je glikolipid stanične membrane. Virulencija Shigella Sonne također ovisi o plazmidu molekulske mase 120 MD. On kontrolira sintezu oko 40 polipeptida vanjske membrane, od kojih je sedam povezano s virulencijom. Shigella Sonne, s ovim plazmidom, formira kolonije faze I i virulentne su. Kulture koje su izgubile plazmid formiraju kolonije faze II i nemaju virulentnost. Plazmidi vidi 120-140 MD su pronađeni u Shigella Flexner i Boyd. Shigella lipopolisaharid je jak endotoksin.
Postinfektivni imunitet
Kao što su promatranja majmuna pokazala, nakon preboljele dizenterije ostaje jak i prilično dugotrajan imunitet. Uzrokuju ga antimikrobna protutijela, antitoksini, povećana aktivnost makrofaga i T-limfocita. Značajnu ulogu ima lokalizacija crijevne sluznice posredovana IgA. Međutim, imunitet je specifičan za određeni tip; ne dolazi do snažnog unakrsnog imuniteta.
Epidemiologija dizenterije
Jedini izvor zaraze je. Nijedna životinja u prirodi ne boluje od dizenterije. U eksperimentalnim uvjetima, dizenterija se može reproducirati samo kod majmuna. Način infekcije je fekalno-oralni. Putevi prijenosa: voda (prevladava za Shigella Flexner), hrana, osobito mlijeko i mliječni proizvodi (prevladava put zaraze za Shigella Sonne), te kontakt u kućanstvu, osobito za vrstu S. dysenteriae.
Značajka epidemiologije dizenterije je promjena u sastavu vrsta patogena, kao i biotipova Sonne i Flexner serotipova u određenim regijama. Na primjer, do kraja 30-ih. XX. stoljeća S. dysenteriae 1 činio je do 30-40% svih slučajeva dizenterije, a zatim je ovaj serotip postao sve rjeđi i gotovo nestao. Međutim, 1960-1980-ih. S. dysenteriae ponovno se pojavila na povijesnoj pozornici i izazvala niz epidemija koje su dovele do formiranja tri hiperendemična žarišta – u Srednjoj Americi, Srednjoj Africi i Južnoj Aziji (Indija, Pakistan, Bangladeš i druge zemlje). Razlozi promjene vrstnog sastava uzročnika dizenterije vjerojatno su povezani s promjenama kolektivne imunosti i promjenama svojstava bakterija dizenterije. Konkretno, povratak S. dysenteriae 1 i njegova raširena distribucija, koja je uzrokovala stvaranje hiperendemičnih žarišta dizenterije, povezani su s njezinim stjecanjem plazmida, što je uzrokovalo multidrug i povećanu virulenciju.
Simptomi dizenterije
Razdoblje inkubacije dizenterije je 2-5 dana, ponekad manje od jednog dana. Formiranje infektivnog žarišta u sluznici silaznog dijela debelog crijeva (sigmoid i rektum), gdje prodire uzročnik dizenterije, ima cikličku prirodu: adhezija, kolonizacija, uvođenje Shigella u citoplazmu enterocita, njihov intracelularni reprodukcija, uništavanje i odbacivanje epitelnih stanica, otpuštanje patogena u lumen crijeva; nakon toga počinje sljedeći ciklus - adhezija, kolonizacija itd. Intenzitet ciklusa ovisi o koncentraciji uzročnika u parijetalnom sloju sluznice. Kao rezultat ponovljenih ciklusa, žarište upale raste, nastali čirevi, spajajući se, povećavaju izloženost crijevne stijenke, zbog čega se u izmetu pojavljuju krv, mukopurulentne nakupine i polimorfonuklearni leukociti. Citotoksini (SLT-I i SLT-II) uzrokuju razaranje stanica, enterotoksini – proljev, endotoksini – opću intoksikaciju. Klinička slika dizenterije uvelike je određena vrstom egzotoksina koju uzročnik u većoj mjeri proizvodi, stupnjem njegovog alergenskog učinka i imunološkim stanjem tijela. Međutim, mnoga pitanja patogeneze dizenterije ostaju nejasna, posebice: značajke tijeka dizenterije u djece prve dvije godine života, razlozi prijelaza akutne dizenterije u kroničnu, značaj senzibilizacije, mehanizam lokalne imunosti crijevne sluznice itd. Najtipičnije kliničke manifestacije dizenterije su proljev, učestali nagon: u teškim slučajevima do 50 i više puta dnevno, tenezmi (bolni grčevi rektuma) i opća intoksikacija. Priroda stolice određena je stupnjem oštećenja debelog crijeva. Najtežu dizenteriju uzrokuje S. dysenteriae 1, najblaža je dizenterija Sonne.
Laboratorijska dijagnostika dizenterije
Glavna metoda je bakteriološka. Materijal za istraživanje je izmet. Shema izolacije patogena: inokulacija na diferencijalne dijagnostičke medije Endo i Ploskirev (paralelno na medij za obogaćivanje nakon čega slijedi inokulacija na Endo i Ploskirev medije) za izolaciju izoliranih kolonija, dobivanje čiste kulture, proučavanje njezinih biokemijskih svojstava i, uzimajući u obzir potonje, identifikacija pomoću polivalentnih i monovalentnih dijagnostičkih aglutinirajućih seruma. Proizvode se sljedeći komercijalni serumi.
Za Shigelle koje ne fermentiraju manitol:
na S. dysenteriae 1 i 2 (polivalentni i monovalentni),
na S. dysenteriae 3-7 (polivalentni i monovalentni),
na S. dysenteriae 8-12 (polivalentni i monovalentni).
Na Shigella fermentirajući manitol: na tipične antigene S. flexneri I, II, III, IV, V, VI, na antigene grupe S. flexneri 3, 4, 6,7,8 - polivalentni, na antigene S. boydii 1-18 ( polivalentni i monovalentni), na antigene S. sonnei faza I, faza II, na antigene S. flexneri I-VI + S. sonnei - polivalentni.
Za brzo identificiranje Shigella preporučuje se sljedeća metoda: sumnjiva kolonija (negativna na laktozu na Endo mediju) se potkulturira na TSI (trostruko šećerno željezo) mediju - trostruki šećerni agar (glukoza, laktoza, saharoza) sa željezom kako bi se odredila proizvodnja H2S; ili na medij koji sadrži glukozu, laktozu, saharozu, željezo i ureu.
Svaki organizam koji razgrađuje ureu nakon 4 do 6 sati inkubacije najvjerojatnije je pripadnik roda Proteus i može se isključiti. Organizam koji proizvodi H,S, ili ima ureazu, ili proizvodi kiselinu na zglobu (fermentira laktozu ili saharozu) može se isključiti, iako se sojevi koji proizvode H2S trebaju istražiti kao mogući članovi roda Salmonella. U svim drugim slučajevima treba ispitati kulturu uzgojenu na tim podlogama i, ako fermentira glukozu (promjena boje kolone), izolirati je u čistom obliku. Istodobno se može testirati u reakciji aglutinacije na staklu s odgovarajućim antiserumima za rod Shigella. Po potrebi se provode i drugi biokemijski testovi za provjeru pripadnosti rodu Shigella, te proučavanje pokretljivosti.
Za otkrivanje antigena u krvi (uključujući kao dio CEC-a), urinu i izmetu mogu se koristiti sljedeće metode: RPGA, RSK, reakcija koaglutinacije (u urinu i izmetu), IFM, RAGA (u krvnom serumu). Ove su metode vrlo učinkovite, specifične i pogodne za ranu dijagnostiku.
Za serološku dijagnostiku mogu se koristiti: RPHA s pripadajućom dijagnostikom eritrocita, imunofluorescencijska metoda (indirektna modifikacija), Coombsova metoda (određivanje titra nepotpunih protutijela). Dijagnostičku vrijednost ima i alergotest s dizenterinom (otopina proteinskih frakcija Shigella Flexner i Sonne). Reakcija se uzima u obzir nakon 24 sata. Smatra se pozitivnom u prisutnosti hiperemije i infiltrata promjera 10-20 mm.
Liječenje dizenterije
Glavna pozornost posvećena je uspostavljanju normalnog metabolizma vode i soli, racionalnoj prehrani, detoksikaciji, racionalnoj antibiotskoj terapiji (uzimajući u obzir osjetljivost patogena na antibiotike). Dobar učinak postiže se ranom primjenom polivalentnog dizenterijskog bakteriofaga, osobito tableta s pektinskom ovojnicom, koja štiti fag od djelovanja želučanog soka HC1; U tankom crijevu pektin se otapa, fagi se oslobađaju i ostvaruju svoj učinak. U preventivne svrhe, fag treba dati najmanje jednom svaka tri dana (razdoblje njegovog preživljavanja u crijevima).
Specifična prevencija dizenterije
Za stvaranje umjetne imunosti protiv dizenterije korištena su razna cjepiva: od ubijenih bakterija, kemijska, alkoholna, no sva su se pokazala neučinkovitima i ukinuta su. Cjepiva protiv Flexnerove dizenterije stvorena su od žive (mutirane, ovisne o streptomicinu) Shigelle Flexner; ribosomska cjepiva, ali ni ona nisu našla široku primjenu. Stoga problem specifične dizenterije ostaje neriješen. Glavni način borbe protiv dizenterije je poboljšanje vodoopskrbnog i kanalizacijskog sustava, osiguranje strogih sanitarnih i higijenskih režima u prehrambenim poduzećima, posebno u mliječnoj industriji, u dječjim ustanovama, na javnim mjestima iu održavanju osobne higijene.
Preliminarni zaključak: prema biokemijskim karakteristikama izolirana kultura odgovara podskupini Shigella _______________________________
4. Provesti reakciju aglutinacije na staklu izolirane kulture s tipospecifičnim serumima na Flexnerove šigele (1,2,3), usporediti dobivene rezultate s tablicom 3 i dati zaključak.
Tablica 3
Klasifikacija Shigella prema antigenskoj strukturi
| Podskupina | Serovar | |||
| A- S. dysenteriae | 1-10 | |||
| B- S. flexneri | 1a | 1b | ||
| 2a | 2b | |||
| 3a | 3b | 3s | ||
| 4a | 4b | |||
| x | ||||
| e | ||||
| x | ||||
| na | ||||
| C- S. boydii | 1-15 | |||
| D- S. sonnei | - |
Zaključak: Shigella flexneri izolirana je iz stolice bolesnika;
serovar ________________________________________________________________
5. Dopuniti shemu za laboratorijsku dijagnostiku dizenterije.
Istraživo
materijal:
| Stadij I Stadij II |
|
||||||
| Stadij III |  RA s vrstom, tipom, podtipom dijagnostičkih seruma |
||||||
Navedite svojstva šigela potrebna za određivanje njihove vrste, tipa i podtipa: _____________________________________________________________________
____________________________________________________________________________________
6. Navedite čimbenike patogenosti Shigella: __________________________
________________________________________________________________________________________________________________________________________________
III. Studijski dijagnostički pripravci (dijagnostički imunološki serumi, dijagnostikumi, antigeni)
| SRS: Helicobacter, svojstva, faktori patogenosti. Laboratorijska dijagnoza helikobakterioze. | |||
| 1. | Taksonomski položaj bakterija roda Helicobacter. | ||
| 2. | Značajke morfologije, kulture i biokemijskih svojstava Helicobacteria. | ||
| 3. | Čimbenici patogenosti H. pylori. | ||
| 4. | Patogeneza lezija sluznice želuca i dvanaesnika uzrokovanih Helicobacter pylori. Uloga H. pylori u patogenezi želučanog i duodenalnog ulkusa | ||
| 5. | Metode laboratorijske dijagnostike helikobakterioze. | ||
| Apstraktne teme: |
|||
Potpis nastavnika _______________________________________
Datum od__________________
Lekcija 4
Predmet: Salmonella tifus, paratifus i gastroenteritis. Laboratorijska dijagnostika salmoneloze.
Pitanja za raspravu:
1. Klasifikacija salmonela. Ključne značajke u identifikaciji salmonele.
2. Čimbenici patogenosti salmonela trbušnog tifusa i patogeneza bolesti.
3. Faze laboratorijske dijagnostike trbušnog tifusa u dinamici bolesti.
4. Čimbenici patogenosti salmonela – uzročnika gastroenteritisa.
5. Laboratorijska dijagnostika Salmonella gastroenteritisa.
6. Prevencija trbušnog tifusa, paratifusa i salmoneloznog gastroenteritisa.
Praktični zadaci:
I. Bakteriološka pretraga krvi bolesnika.
1. Proučite rezultat uzgoja hemokultura u 10% žučnom bujonu i zabilježite promjene u mediju.
3. Odrediti enzimska svojstva izolirane hemokulture u Olkenitskyjevom mediju i dati preliminarni zaključak.
4. Proučite biokemijska svojstva salmonele u Hissovim medijima (demonstracija) i usporedite ih s podacima prikazanim u tablici 1.
Shigella ima prilično visoku otpornost na čimbenike okoliša. Preživljavaju na pamučnoj tkanini i papiru do 0-36 dana, u osušenom izmetu - do 4-5 mjeseci, u tlu - do 3-4 mjeseca, u vodi - od 0,5 do 3 mjeseca, na voću i povrću - do 2 tjedna, u mlijeku i mliječnim proizvodima - do nekoliko tjedana; na temperaturi od 60 C ugibaju za 15-20 minuta. Osjetljivo na otopine kloramina, aktivni klor i druga sredstva za dezinfekciju.
Čimbenici patogenosti Shigella
Najvažnije biološko svojstvo šigela, koje određuje njihovu patogenost, jest sposobnost invazije epitelnih stanica, razmnožavanja u njima i uzrokovanja njihove smrti. Ovaj se učinak može otkriti pomoću keratokonjunktivalnog testa (uvođenje jedne petlje kulture Shigella (2-3 milijarde bakterija) ispod donjeg kapka zamorca uzrokuje razvoj serozno-gnojnog keratokonjunktivitisa), kao i infekcijom stanica kulturama (citotoksični učinak) ili pilećim embrijima (njihova smrt), ili intranazalno u bijelih miševa (razvoj pneumonije). Glavni faktori patogenosti Shigella mogu se podijeliti u tri skupine:
- čimbenici koji određuju interakciju s epitelom sluznice;
- čimbenici koji osiguravaju otpornost na humoralne i stanične obrambene mehanizme makroorganizma i sposobnost šigele da se razmnožava u svojim stanicama;
- sposobnost stvaranja toksina i toksičnih proizvoda koji određuju razvoj samog patološkog procesa.
U prvu skupinu spadaju čimbenici adhezije i kolonizacije: njihovu ulogu igraju pili, proteini vanjske membrane i LPS. Adheziju i kolonizaciju pospješuju enzimi koji uništavaju sluz - neuraminidaza, hijaluronidaza, mucinaza. Druga skupina uključuje čimbenike invazije koji potiču prodiranje Shigella u enterocite i njihovu reprodukciju u njima iu makrofagima uz istodobnu manifestaciju citotoksičnog i (ili) enterotoksičnog učinka. Ova svojstva kontroliraju geni plazmida molekularne težine 140 MD (kodira sintezu proteina vanjske membrane koji uzrokuju invaziju) i kromosomski geni Shigella: ksr A (uzrokuje keratokonjunktivitis), cyt (odgovoran za uništavanje stanica ), kao i drugi geni koji još nisu identificirani. Zaštitu Shigella od fagocitoze osigurava površinski K-antigen, antigeni 3,4 i lipopolisaharid. Osim toga, lipid A endotoksina Shigella ima imunosupresivni učinak: potiskuje aktivnost stanica imunološke memorije.
Treću skupinu čimbenika patogenosti čine endotoksin i dvije vrste egzotoksina koje nalazimo u Shigella - Shiga i egzotoksini slični Shigi (SLT-I i SLT-II), čija su citotoksična svojstva najjače izražena u S. dysenteriael. Shiga- i shiga-slični toksini također se nalaze u drugim serotipovima S. dysenteriae; također ih proizvode S.flexneri, S. boydii, EHEC i neke Salmonella. Sintezu ovih toksina kontroliraju tox geni konvertirajućih faga. Enterotoksini tipa LT nalaze se u Shigella Flexner, Sonne i Boyd. Njihovu LT sintezu kontroliraju plazmidni geni. Enterotoksin stimulira aktivnost adenilat ciklaze i odgovoran je za razvoj proljeva. Shiga toksin, ili ne-irotoksin, ne reagira sa sustavom adenilat ciklaze, ali ima izravan citotoksični učinak. Shiga i shigi slični toksini (SLT-I i SLT-II) imaju m.m. 70 kDa i sastoje se od podjedinica A i B (zadnja od 5 identičnih malih podjedinica). Receptor za toksine je glikolipid stanične membrane. Virulencija Shigella Sonne također ovisi o plazmidu molekulske mase 120 MD. On kontrolira sintezu oko 40 polipeptida vanjske membrane, od kojih je sedam povezano s virulencijom. Shigella Sonne, s ovim plazmidom, formira kolonije faze I i virulentne su. Kulture koje su izgubile plazmid formiraju kolonije faze II i nemaju virulentnost. Plazmidi vidi 120-140 MD su pronađeni u Shigella Flexner i Boyd. Shigella lipopolisaharid je jak endotoksin.
Postinfektivni imunitet
Kao što su promatranja majmuna pokazala, nakon preboljele dizenterije ostaje jak i prilično dugotrajan imunitet. Uzrokuju ga antimikrobna protutijela, antitoksini, povećana aktivnost makrofaga i T-limfocita. Značajnu ulogu ima lokalna imunost crijevne sluznice, posredovana IgA. Međutim, imunitet je specifičan za određeni tip; ne dolazi do snažnog unakrsnog imuniteta.
Epidemiologija dizenterije
Izvor zaraze je samo čovjek. Nijedna životinja u prirodi ne boluje od dizenterije. U eksperimentalnim uvjetima, dizenterija se može reproducirati samo kod majmuna. Način infekcije je fekalno-oralni. Načini prijenosa su voda (prevladava za Shigella Flexner), hrana, posebno važnu ulogu imaju mlijeko i mliječni proizvodi (prevladava put infekcije za Shigella Sonne), te kontakt u kućanstvu, osobito za vrstu S. dysenteriae.
Značajka epidemiologije dizenterije je promjena u sastavu vrsta patogena, kao i biotipova Sonne i Flexner serotipova u određenim regijama. Na primjer, do kraja 30-ih. XX. stoljeća S. dysenteriae 1 činio je do 30-40% svih slučajeva dizenterije, a zatim je ovaj serotip postao sve rjeđi i gotovo nestao. Međutim, 1960-1980-ih. S. dysenteriae ponovno se pojavila na povijesnoj pozornici i izazvala niz epidemija koje su dovele do formiranja tri hiperendemična žarišta – u Srednjoj Americi, Srednjoj Africi i Južnoj Aziji (Indija, Pakistan, Bangladeš i druge zemlje). Razlozi promjene vrstnog sastava uzročnika dizenterije vjerojatno su povezani s promjenama kolektivne imunosti i promjenama svojstava bakterija dizenterije. Konkretno, povratak S. dysenteriae 1 i njegova raširena distribucija, koja je uzrokovala stvaranje hiperendemskih žarišta dizenterije, povezani su s njegovim stjecanjem plazmida koji su uzrokovali rezistenciju na više lijekova i povećanu virulenciju.
Simptomi dizenterije
Razdoblje inkubacije dizenterije je 2-5 dana, ponekad manje od jednog dana. Formiranje infektivnog žarišta u sluznici silaznog dijela debelog crijeva (sigmoid i rektum), gdje prodire uzročnik dizenterije, ima cikličku prirodu: adhezija, kolonizacija, uvođenje Shigella u citoplazmu enterocita, njihov intracelularni reprodukcija, uništavanje i odbacivanje epitelnih stanica, otpuštanje patogena u lumen crijeva; nakon toga počinje sljedeći ciklus - adhezija, kolonizacija itd. Intenzitet ciklusa ovisi o koncentraciji uzročnika u parijetalnom sloju sluznice. Kao rezultat ponovljenih ciklusa, žarište upale raste, nastali čirevi, spajajući se, povećavaju izloženost crijevne stijenke, zbog čega se u izmetu pojavljuju krv, mukopurulentne nakupine i polimorfonuklearni leukociti. Citotoksini (SLT-I i SLT-II) uzrokuju razaranje stanica, enterotoksin - proljev, endotoksini - opću intoksikaciju. Klinička slika dizenterije uvelike je određena vrstom egzotoksina koju uzročnik u većoj mjeri proizvodi, stupnjem njegovog alergenskog učinka i imunološkim stanjem tijela. Međutim, mnoga pitanja patogeneze dizenterije ostaju nejasna, posebice: značajke tijeka dizenterije u djece prve dvije godine života, razlozi prijelaza akutne dizenterije u kroničnu, značaj senzibilizacije, mehanizam lokalne imunosti crijevne sluznice itd. Najtipičnije kliničke manifestacije dizenterije su proljev, učestali nagon: u teškim slučajevima do 50 i više puta dnevno, tenezmi (bolni grčevi rektuma) i opća intoksikacija. Priroda stolice određena je stupnjem oštećenja debelog crijeva. Najtežu dizenteriju uzrokuje S. dysenteriae 1, najblaža je dizenterija Sonne.
Na Shigella fermentirajući manitol: na tipične antigene S. flexneri I, II, III, IV, V, VI, na antigene grupe S. flexneri 3, 4, 6,7,8 - polivalentni, na antigene S. boydii 1-18 ( polivalentni i monovalentni), na antigene S. sonnei faza I, faza II, na antigene S. flexneri I-VI + S. sonnei - polivalentni.
Za brzo identificiranje Shigella preporučuje se sljedeća metoda: sumnjiva kolonija (negativna na laktozu na Endo mediju) se potkulturira na TSI (trostruko šećerno željezo) mediju - trostruki šećerni agar (glukoza, laktoza, saharoza) sa željezom kako bi se odredila proizvodnja H2S; ili na medij koji sadrži glukozu, laktozu, saharozu, željezo i ureu.
Svaki organizam koji razgrađuje ureu nakon 4 do 6 sati inkubacije najvjerojatnije je pripadnik roda Proteus i može se isključiti. Organizam koji proizvodi H,S, ili ima ureazu, ili proizvodi kiselinu na zglobu (fermentira laktozu ili saharozu) može se isključiti, iako se sojevi koji proizvode H2S trebaju istražiti kao mogući članovi roda Salmonella. U svim drugim slučajevima treba ispitati kulturu uzgojenu na tim podlogama i, ako fermentira glukozu (promjena boje kolone), izolirati je u čistom obliku. Istodobno se može testirati u reakciji aglutinacije na staklu s odgovarajućim antiserumima za rod Shigella. Po potrebi se provode i drugi biokemijski testovi za provjeru pripadnosti rodu Shigella, te proučavanje pokretljivosti.
Za otkrivanje antigena u krvi (uključujući kao dio CEC-a), urinu i izmetu mogu se koristiti sljedeće metode: RPGA, RSK, reakcija koaglutinacije (u urinu i izmetu), IFM, RAGA (u krvnom serumu). Ove su metode vrlo učinkovite, specifične i pogodne za ranu dijagnostiku.
Za serološku dijagnostiku mogu se koristiti: RPHA s pripadajućom dijagnostikom eritrocita, imunofluorescencijska metoda (indirektna modifikacija), Coombsova metoda (određivanje titra nepotpunih protutijela). Dijagnostičku vrijednost ima i alergotest s dizenterinom (otopina proteinskih frakcija Shigella Flexner i Sonne). Reakcija se uzima u obzir nakon 24 sata. Smatra se pozitivnom u prisutnosti hiperemije i infiltrata promjera 10-20 mm.
Specifična prevencija dizenterije
Za stvaranje umjetne imunosti protiv dizenterije korištena su razna cjepiva: od ubijenih bakterija, kemijska, alkoholna, no sva su se pokazala neučinkovitima i ukinuta su. Cjepiva protiv Flexnerove dizenterije stvorena su od žive (mutirane, ovisne o streptomicinu) Shigelle Flexner; ribosomska cjepiva, ali ni ona nisu našla široku primjenu. Stoga ostaje neriješen problem specifične prevencije dizenterije. Glavni način borbe protiv dizenterije je poboljšanje vodoopskrbnog i kanalizacijskog sustava, osiguranje strogih sanitarnih i higijenskih režima u prehrambenim poduzećima, posebno u mliječnoj industriji, u dječjim ustanovama, na javnim mjestima iu održavanju osobne higijene.
Rod Shigella .
Shigella je crijevni patogen ljudi i primata koji uzrokuje bacilarna dizenterija odnosno šigeloza. U skladu s antigenskom strukturom O-antigena i biokemijskim svojstvima, poznati serotipovi Shigella podijeljeni su u četiri vrste ili serogrupe - S.dysenteriae (serogrupa A), S.flexneri (serogrupa B), S.boydii (serogrupa C ) i S.sonnei (serogrupa D).
Po morfološke karakteristike Shigella se ne razlikuje od ostalih enterobakterija. To su nespecifični fakultativno anaerobni gram-negativni štapići.
Biokemijska svojstva . Shigella je biokemijski neaktivna u usporedbi s drugim crijevnim bakterijama. Ne stvaraju sumporovodik na željeznom agaru s tri šećera i ne fermentiraju ureu.
Sojevi S. dysenteriae (serogrupa A) imaju najmanju enzimsku aktivnost, fermentiraju samo glukozu bez stvaranja plina; za razliku od drugih Shigella, ova vrsta je manitol-negativna.
Shigella Flexner fermentira manitol i proizvodi indol, ali ne fermentira laktozu, dulcit i ksilozu. Newcastleski serotip dijeli se na tri biokemijska tipa. Za Shigella Flexner tipičniji je vodeni put prijenosa.
Boydove šigele (serogrupa C) imaju sličnu biokemijsku aktivnost, ali fermentiraju dulcit, ksilozu i arabinozu. Imaju niz serotipova, od kojih svaki ima svoj glavni tip antigena.
Shigella Sonne (serogrupa D) sposobna je polagano fermentirati laktozu i saharozu i ima biokemijske tipove i fagotipove. Glavni put prijenosa je hrana (obično mlijekom i mliječnim proizvodima).
Antigenska struktura . Shigella ima O- i K-antigene. O-antigeni imaju epitope različite specifičnosti - od onih uobičajenih za obitelj enterobakterija do onih specifičnih za tip. Klasifikacija uzima u obzir samo termostabilnu skupinu (četiri skupine ili tipa - A, B, C i D) i tipsku (podjela na serotipove). Toplinski labilni antigeni uključuju K-antigene (nalaze se u skupinama A i C) i fimbrijalne antigene (kod Shigelle Flexner su antigenski slični E.coli). Za konačnu identifikaciju potrebno je određivanje antigenske strukture.
Epidemiologija . Shigella je prilično stabilna u vanjskom okruženju. Izvor infekcije je osoba s različitim oblicima kliničkih manifestacija šigeloze. Mehanizam infekcije je fekalno-oralni. Različite vrste Shigella karakteriziraju prevladavajući putovi prijenosa (kontaktno-kućanstvo - za S.dysenteriae, hrana - za S.sonnei, voda - za S.flexneri). Epidemijski proces karakterizira promjena u strukturi cirkulirajućih populacija uzročnika - promjena vodećih vrsta, biovara, serovara, što je povezano i s promjenama u populacijskom imunitetu i s promjenama u svojstvima uzročnika, posebno s akvizicijom raznih plazmida (R, F, Col, itd.). Infektivna doza je oko 200 - 300 Shigella. Dizenterija uzrokovana Shigella Sonne ima blaži tijek.
Čimbenici patogenosti i patogeneza lezija . Glavna biološka karakteristika Shigella je sposobnost invazije epitelnih stanica, razmnožavanja u njima i uzroka njihove smrti. Stvaranje lezije u sluznici silaznog debelog crijeva (sigmoidnog i rektuma) je cikličko: adhezija, kolonizacija, uvođenje šigela u citoplazmu enterocita, razmnožavanje, razaranje i odbacivanje epitelnih stanica, otpuštanje šigela u lumen crijeva, izbacivanje šigela u lumen crijeva ponovno prianjanje itd.
Uloga faktori adhezije i kolonizacije izvode pili, proteini vanjske membrane, LPS, enzimi - neuraminidaza, mucinaza, hijaluronidaza (razaraju sluz).
Shigella ima raspon od čimbenici invazije i otpora na djelovanje obrambenih mehanizama (K-antigen, LPS i dr.) kontroliranih kromosomskim genima i plazmidima Shigella.
Šigele imaju različite toksina. Imaju endotoksin i citotoksine slične Shigi (SLT-1, SLT-2). Citotoksini uzrokuju razaranje stanica, enterotoksin proljev, a endotoksin opću intoksikaciju. Shiga toksin uzrokuje poremećaj sinteze proteina, apsorpciju iona natrija i vode te dotok tekućine u mjesto upale.
Najtipičniji znakovi dizenterije su proljev, tenezmi(bolni grčevi rektuma) i česti nagoni, opća intoksikacija. Priroda stolice određena je stupnjem oštećenja debelog crijeva.
Postinfektivni imunitet - izdržljiv, specifičan za vrstu.
Laboratorijska dijagnostika . Glavna dijagnostička metoda je bakteriološka. Izmet se inokulira na diferencijalno dijagnostičke medije Endo i Ploskirev kako bi se dobile izolirane kolonije. Čiste kulture proučavaju se prema njihovim biokemijskim svojstvima, identifikacija se provodi u RA s poli- i monovalentnim serumima. Ako izolirana kultura ima biokemijska svojstva Shigella, ali ne aglutinira serume na O-antigene, mora se kuhati 30 minuta kako bi se uništili toplinski labilni K-antigeni, koji često sprječavaju aglutinaciju Shigella serogrupa A i C (tj. koji imaju K-antigene), i ponovno istraživanje RA.
Za serološku dijagnostiku koristi se RPGA s grupnom dijagnostikom eritrocita.
Karakteristike roda Shigella ( šigela )
Uzrokuje šigelozu (bivšu dizenteriju)
Karakterizira ga specifično oštećenje debelog crijeva, intoksikacija i proljev.
Ime dolazi od japanskog Shiga. Godine 1898. opisao ga je, prije njega Vidal i Chentemes.
Morfologija – šipke debljine 0,4-0,8 mikrona, dužine 1-2 mikrona. Nemaju spore ni kapsule, a šigele nemaju bičeve. Nisu mobilni.
Klasifikacija.
Rod Shigella uključuje 4 vrste.
1. vrsta – Shigella dysenteriae (S.dysenteriae) 1-12 serovara, ne razgrađuje monitis.
2. vrsta – Shigella flexera (S.Dlecneri1-7,x,y)
3. vrsta – Shigella Boyda (S.Boydu1-18)
4. vrsta - S.zonnei - nema serotipova, razgrađuje manitol, saharozu, laktozu.
Kulturna dobra– dobro rastu na jednostavnim hranjivim podlogama, fakultativni anaerobi. Optimumph – 7.S – oblik rasta. Na diferencijalnoj podlozi s laktozom nalaze se prozirne bezbojne kolonije.
Enzimska svojstva su niža od ostalih. Razgrađuje šećere samo do kiseline, ne stvara sumporovodik. U odnosu na laktozu, S.Zonnein se razgrađuje unutar 2-3 dana.
Antigeni- imaju O antigen, koji određuje tipsku specifičnost, a K antigen Nema antigena, jer nema flagela i nisu pokretne.
Otpornost na čimbenike okoliša. U izmetu, tlu - 3-5 mjeseci, u tekućoj vodi - 3 mjeseca, na povrću i voću 2 tjedna. Kad se kuhaju, odmah umiru. Vrlo osjetljiv na dezinficijens. Sredstva.
Patogenost – vrlo visoka adhezivna svojstva. Postoje membranski proteini koji osiguravaju pričvršćivanje Shigella na epitel distalnih dijelova debelog crijeva. Visoko invazivna. Kao i svi Gr(-) sadrže endotoksin koji ima svojstva citotoksina - taj se toksin naziva Shego toksin. Ako se nalazi u drugim bakterijama, naziva se Shego-slična.
Postoje antifagocitna svojstva, faktori patogenosti određeni su ne samo u kromosomskim, već iu plazmidnim genima.
Patogeneza i oštrica. Razdoblje inkubacije je 1-7 dana. U sluznici se stvara žarište gdje se mikrobi pričvršćuju, koloniziraju, napadaju citoplazmu, uzrokuju staničnu smrt i ulaze u sljedeće stanice. U takvih se bolesnika u stolici pojavljuju sluz i krv; kliničari kažu da je stolica poput želea od malina.
Imunitet je tipospecifičan, titri su niski, niska napetost, pa se mogu javiti ponovljeni slučajevi.
Laboratorijska dijagnostika– rektalna sluz, sanitarni predmeti, površinska ispiranja, uzorci vode.
Primarno nasađivanje provodi se istovremeno i na akumulativnom mediju i na mediju s laktozom. Posebna sredina je Ploskireva. Nakon dobivanja kolonija negativnih na laktozu. Oni se subkulturiraju na Resselovom mediju za akumulaciju kulture, a zatim se provodi konačna identifikacija na temelju biokemijskih i antigenskih svojstava. Sve ostale metode su neinformativne i ne koriste se.
Specifična prevencija je cjepivo ubijeno alkoholom, ali nije vrlo učinkovito i praktički se ne koristi čak ni za epidemiološke indikacije.
